乳酸脫氫酶（LDH）測試盒微量法

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

商品介紹：

試劑組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟：

1. 樣品的準(zhǔn)備：

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：

a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

100次 肽還原檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

250mL Maleate Buffer（馬來酸緩沖液）,0.2M,pH6.0  Maleate Buffer,0.2M,pH6.0  常溫保存

25OD G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

幽門螺旋桿菌固體培養(yǎng)基 Helicobacter Pylori Medium 250g

1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]細(xì)胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運(yùn)輸和保存

葡萄糖肉浸液肉湯 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

100g 纖維素 DE-52 Cellulose，DE-52 室溫干燥保存

50mL Zinc Acetate Solution（乙酸鋅溶液）,100mM  Zinc Acetate Solution,100mM  常溫保存

5g 脫氧膽酸鈉 Sodium Deoxycholate 常溫保存

2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

乳酸脫氫酶（LDH）測試盒微量法CMT/Icmt  異戊烯半胱羧基甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml

BAP31  BAP31蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

glypican 1  磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體 規(guī)格: 0.2ml

ORAV1  口腔高表達(dá)的蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

FGF16  成纖維細(xì)胞生因子16抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-LCK(Tyr394)  磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1ml

Sin3b  轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)  磷酸化心臟磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受體3抗體 規(guī)格: 0.2ml

PDK2  丙酮酸脫激亞型2抗體 規(guī)格: 0.2ml

BOb-1/POU2AF1  B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱：乳酸脫氫酶（LDH）測試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

檢測方法：微量法

產(chǎn)品貨號：BK-01S6325

產(chǎn)品分類：輔酶Ⅰ系列
商品介紹：

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

100次 肽還原檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

250mL Maleate Buffer（馬來酸緩沖液）,0.2M,pH6.0  Maleate Buffer,0.2M,pH6.0  常溫保存

25OD G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

幽門螺旋桿菌固體培養(yǎng)基 Helicobacter Pylori Medium 250g

1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]細(xì)胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運(yùn)輸和保存

葡萄糖肉浸液肉湯 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

100g 纖維素 DE-52 Cellulose，DE-52 室溫干燥保存

50mL Zinc Acetate Solution（乙酸鋅溶液）,100mM  Zinc Acetate Solution,100mM  常溫保存

5g 脫氧膽酸鈉 Sodium Deoxycholate 常溫保存

2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

乳酸脫氫酶（LDH）測試盒微量法CMT/Icmt  異戊烯半胱羧基甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml

BAP31  BAP31蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

glypican 1  磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體 規(guī)格: 0.2ml

ORAV1  口腔高表達(dá)的蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

FGF16  成纖維細(xì)胞生因子16抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-LCK(Tyr394)  磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1ml

Sin3b  轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)  磷酸化心臟磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受體3抗體 規(guī)格: 0.2ml

PDK2  丙酮酸脫激亞型2抗體 規(guī)格: 0.2ml

BOb-1/POU2AF1  B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格: 0.1ml 

注意事項(xiàng)：

1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？

對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通常可以使測定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。