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      乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法

      簡要描述:乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法輔酶Ⅰ系列公司正在出售的產(chǎn)品:氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基(顆粒) 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g 緩沖蛋白胨水(BPW)顆粒 英文名稱:Buffered Peptone Water 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Thioglycollate Medium 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基顆粒 英文名稱:Thioglyc

      • 產(chǎn)品型號:
      • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
      • 更新時(shí)間:2023-12-29
      • 訪  問  量:604

      詳細(xì)介紹

      本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

      產(chǎn)品名稱

      規(guī)格

      檢測方法

      貨號

      乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法

      100管/48樣

      微量法

      BK-01S6325

      商品介紹:

      測定意義

      測定意義:

      LDHEC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

      測定原理:

      LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

      需自備的儀器和用品:

      可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

      試劑組成和配制:

      提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

      試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

      實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

      1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。

      2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

      3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

      4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

      與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

      ① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

      ② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

      ③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

      ④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

      ⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

       

      操作步驟:

      1. 樣品的準(zhǔn)備:

      a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

      b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

      d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

      e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。

      2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

      a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

      注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

      b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

      c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

      100次 肽還原檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

      250mL Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.0  Maleate Buffer,0.2M,pH6.0  常溫保存

      25OD G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

      2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      幽門螺旋桿菌固體培養(yǎng)基 Helicobacter Pylori Medium 250g

      1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]細(xì)胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運(yùn)輸和保存

      葡萄糖肉浸液肉湯 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

      100g 纖維素 DE-52 Cellulose,DE-52 室溫干燥保存

      50mL Zinc Acetate Solution(乙酸鋅溶液),100mM  Zinc Acetate Solution,100mM  常溫保存

      5g 脫氧膽酸鈉 Sodium Deoxycholate 常溫保存

      2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法CMT/Icmt  異戊烯半胱羧基甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml

      BAP31  BAP31蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

      glypican 1  磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體 規(guī)格: 0.2ml

      ORAV1  口腔高表達(dá)的蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

      FGF16  成纖維細(xì)胞生因子16抗體 規(guī)格: 0.2ml

      Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

      phospho-LCK(Tyr394)  磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1ml

      Sin3b  轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 規(guī)格: 0.2ml

      phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)  磷酸化心臟磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

      GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受體3抗體 規(guī)格: 0.2ml

      PDK2  丙酮酸脫激亞型2抗體 規(guī)格: 0.2ml

      BOb-1/POU2AF1  B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格: 0.1ml

      特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

      產(chǎn)品名稱:乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法

      產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣

      檢測方法:微量法

      產(chǎn)品貨號:BK-01S6325

      產(chǎn)品分類:輔酶Ⅰ系列
      商品介紹:

      測定意義

      測定意義:

      LDHEC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

      測定原理:

      LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

      需自備的儀器和用品:

      可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

      所需的儀器和用品:

      可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

      四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

      建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

      樣本和試劑浪費(fèi)!

      1、樣本制備

      組織樣本:

      取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

      勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

      【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

       

      細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

      先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

      提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

      12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

      4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

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      實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

      一、肝素的配制:

      市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

      肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

      二、血液樣本的收集:

      全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

      1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

      2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

      選擇抗凝的注意點(diǎn):

      ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

      ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

      ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

      ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

      用于測定。

      100次 肽還原檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

      250mL Maleate Buffer(馬來酸緩沖液),0.2M,pH6.0  Maleate Buffer,0.2M,pH6.0  常溫保存

      25OD G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

      2 ug pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 pLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      幽門螺旋桿菌固體培養(yǎng)基 Helicobacter Pylori Medium 250g

      1瓶 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3]細(xì)胞株 PC 61 5.3 [PC 61; PC61.5.3] 低溫運(yùn)輸和保存

      葡萄糖肉浸液肉湯 Dextrose Meat Infusion Broth 250g

      100g 纖維素 DE-52 Cellulose,DE-52 室溫干燥保存

      50mL Zinc Acetate Solution(乙酸鋅溶液),100mM  Zinc Acetate Solution,100mM  常溫保存

      5g 脫氧膽酸鈉 Sodium Deoxycholate 常溫保存

      2 ug pVillin-CRE pVillin-CRE 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      乳酸脫氫酶(LDH)測試盒微量法CMT/Icmt  異戊烯半胱羧基甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml

      BAP31  BAP31蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

      glypican 1  磷脂酰基醇蛋白聚糖-1抗體 規(guī)格: 0.2ml

      ORAV1  口腔高表達(dá)的蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

      FGF16  成纖維細(xì)胞生因子16抗體 規(guī)格: 0.2ml

      Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC  FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

      phospho-LCK(Tyr394)  磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白酪激抗體 規(guī)格: 0.1ml

      Sin3b  轉(zhuǎn)錄抑制蛋白Sin3b抗體 規(guī)格: 0.2ml

      phospho-PLB/phospholamban(phospho Ser16+Thr17)  磷酸化心臟磷蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

      GABR B3/GABA A Receptor beta 3  G氨基丁酸受體3抗體 規(guī)格: 0.2ml

      PDK2  丙酮酸脫激亞型2抗體 規(guī)格: 0.2ml

      BOb-1/POU2AF1  B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體 規(guī)格: 0.1ml 

      注意事項(xiàng):

      1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

      2、對照管只需要做一管。

      3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

      4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?

      對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

      若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

       


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