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      當(dāng)前位置:首頁(yè)   >  產(chǎn)品中心  >  基因檢測(cè)PCR試劑盒  >  熒光定量PCR  >  50次小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒

      小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒

      簡(jiǎn)要描述:小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒及公司相關(guān)產(chǎn)品血沉測(cè)試液500克 兔凝血酶抗凝血酶復(fù)合物(TAT)免疫試劑盒 Rabbit thrombin-aithrombin complex,TAT ELISA Kit
      621-62-5錄代-1,1-二乙氧基xlonoeetel7exy7e dietxyl acetal 前病毒整合位點(diǎn)1(Pim1)ELISA試劑盒 ,英文名: Pim1 ELISA Kit

      • 產(chǎn)品型號(hào):50次
      • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
      • 更新時(shí)間:2024-01-01
      • 訪  問  量:822

      詳細(xì)介紹

      PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
      取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
      兩相分離 1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2mllvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,1530孵育23分鐘。412000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%
      RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后1530孵育10分鐘后,于412000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
      RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,47000rpm離心5分鐘。
      RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
      溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

      原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0E1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研
      特異性強(qiáng)
      PCR
      反應(yīng)的特異性決定因素為:
      引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
      堿基配對(duì)原則;
      Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
      靶基因的特異性與保守性。
      產(chǎn)品名稱:小鼠線粒體DNA通用PCR試劑盒 
      產(chǎn)品規(guī)格: 50
      產(chǎn)品貨號(hào):BK-P96866
      儲(chǔ)存條件:-20避光保存,避免反復(fù)凍融。
      運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。

      產(chǎn)品特點(diǎn):
      高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
      高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
      操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
      高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
      產(chǎn)品特點(diǎn):
      1.
      使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增;
      2.
      反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
      3.
      抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
      PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

      特異性熒光標(biāo)記:
      TaqMan

      TaqMan
      探針的特性:
      15′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAMVIC
      23′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) Quencher, Q
      3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無熒光, RQ分開,發(fā)熒光
      4Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
      相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
      內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actinGAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。

      實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
      1
      RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
      2
      )客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
      3
      )客戶盡量不要提供DNARNA樣品。
      4
      )樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
      實(shí)時(shí)熒光定量PCRquantitative real-time PCRqPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNARNA樣品進(jìn)行定量(包括絕對(duì)定量和相對(duì)定量)和定性分析。
      主要服務(wù):DNARNA的絕對(duì)定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
      主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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