線粒體活性氧產(chǎn)生速率（ROS）測(cè)試盒熒光法

實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：

一、肝素的配制：

市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。

肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集：

全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn)：

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱：線粒體活性氧產(chǎn)生速率（ROS）測(cè)試盒熒光法

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

檢測(cè)方法：熒光法

產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6410

產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：

所需的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定：

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)！

1、樣本制備

注意事項(xiàng)：

1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè)，通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

100mL PEG-TE-LiAc Solution PEG-TE-LiAc Solution 常溫保存

0.1mL×10 SURE化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 SURE Competent Cell -80℃保存

2 ug pNTAP- A pNTAP- A 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

B5培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖） B5 Medium(without agar or sucrose) 250g

2 ug pC-YFP pC-YFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

100U PreScissiom 蛋白 PreScissiom Protease -20℃保存

2 ug p53Blue p53Blue 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

萘啶酮酸(4.0mg) Nalidixic Acid 4.0mg*5

1g  Xanthine   室溫干燥保存

1000支 0.5 mL RNase-free 離心管  常溫

50 T 過氧化氫測(cè)試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

線粒體活性氧產(chǎn)生速率（ROS）測(cè)試盒熒光法Hemopexin/HPX  糖蛋白β-1B抗體 規(guī)格: 0.1mlRNF35  環(huán)指蛋白35抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-chicken IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgM 規(guī)格: 0.1mlCatalase  過氧化抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADAMTS2  整合素樣金屬蛋白與凝2型抗體 0.2mlfactor XIII  凝因子13抗體(纖維蛋白穩(wěn)定因子) 規(guī)格: 0.2ml

Transferrin(1F10)  轉(zhuǎn)鐵蛋白單克隆抗體 規(guī)格: 0.1ml

SERPINB12  絲蛋白抑制劑B12抗體 規(guī)格: 0.2ml

Granzyme D/B/E/N/G/F/H  顆粒D/B/E/N/G/F/H抗體 規(guī)格: 0.1ml

Emerin  Emerin蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

WIG-1/PAG608  野生型P53誘導(dǎo)基因1抗體 0.1ml

APLP2  淀粉樣蛋白β前體樣蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

MDR1/p-GP/CD243 (C-terminus)  多藥耐藥蛋白/P-糖蛋白抗體(C端) 規(guī)格: 0.1ml

TSP50  瘤/睪抗原20抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Histone H2A.X (Tyr143)  磷酸化組蛋白H2AX抗體 規(guī)格: 0.1ml