脲酶 EC3.5.1.5

儀器：
1、分光光度計/酶標儀/半自動生化分析儀（比色測定波長為550nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、臺式離心機
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理：
血清（漿）可直接測定。
紅細胞：需按照試劑盒中說明書上紅細胞的測定方法進行提取后測定。
動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。
培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。

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測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.加溫
1.加標本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
優(yōu)點如下：
1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。
2、取樣量微：本法取手指或耳垂等末梢血20ul～50ul即可測紅細胞中的SOD，只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD，只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD，0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗： X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復(fù)性強。
8、測試面廣：可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等，效果均佳。
實驗通用規(guī)則：

PDE9A Others Human 人 PDE9A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 鐵蛋白質(zhì)量規(guī)格：BR，20%水溶液Ferritin

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)鵝去氧膽酸(標準品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標準品Chenodeoxycholic acid

FRhK-4細胞，恒河猴胚腎細胞 人胚胎胰腺組織來源細胞,CCC-HPE-2細胞 CM-M064小鼠前列腺上皮細胞*培養(yǎng)基100mL鵝去氧膽酸質(zhì)量規(guī)格：>98%Chenodeoxycholic acid

大鼠癌細胞;MADB106(牛)質(zhì)量規(guī)格：BR，27U/mg,進分INSULIN

IL1RAP Others Human 人 IL1R3 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙羥萘酸（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Pamoic acid
PLAUR Others Mouse 小鼠 uPAR / PLAUR / CD87 人細胞裂解液 (陽性對照) 4'-戊基苯乙酮(>95.0%(GC))4'-Pentylacetophenone質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

家貓肺細胞;FCA-L24-(反-4-丙基環(huán)己基)苯腈(>98.0%(GC))4-(trans-4-Propylcyclohexyl)benzonitrile質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

Spike Others MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S2 (aa 726-1296) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 4-磺酰杯[4]芳烴水合物(>94.0%(T))4-Sulfocalix[4]arene Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>94.0%(T)

腦靜脈血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)4-磺酰杯[6]芳烴水和物(>95.0%(HPLC))4-Sulfocalix[6]arene Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 人上皮性卵巢癌細胞，TOV-112D細胞 RH-35(肝癌細胞)4-磺酸杯[8]芳烴水合物(>98.0%(HPLC)(T))4-Sulfocalix[8]arene Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)
CL-0086GNM(人口腔鱗癌頸結(jié)轉(zhuǎn)移癌細胞)5×106cells/瓶×2WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE無菌水(無核酸酶,DEPC處理過)生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma

NRK-52E，大鼠腎細胞酚試劑 3-Mqthyl-2-bqnzothiczolinonq hydrczonq xy7nochloridq monohydrctq 38894-11-0

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KM932 人臍動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基 100mLURIDINE-5'-TRIPHOSPHATE5'-三嶙酸尿苷三鈉超級白色粉末FROZENsigma

人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細胞RNAHCPEC miRNA5 μgHISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封組織學級無色至微黃液體RTsigma

IL23 Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) 9003-53-6聚本 500Polystyrene
脲酶 EC3.5.1.5HDBEC-c adult 人類皮膚血內(nèi)皮細胞(HDBEC)來自成年捐獻者 500,000cells 角膜上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)溴酚紅鈉Bromophenol red,  salt質(zhì)量規(guī)格：>80%,Ind Grade

食管平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)硬脂酸丁酯(>98%，BR)Butyl stearate質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

EPHA3 Others Mouse 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) C10E6，10%溶液C10E6質(zhì)量規(guī)格：BR

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);P19-CAG-tTA-1F3C12E10，10%溶液C12E10質(zhì)量規(guī)格：BR

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A 肺癌細胞，LLC Lewis細胞 PCK細胞，大黃魚腎細胞C12E9, 10%溶液C12E9質(zhì)量規(guī)格：BR

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