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      UDPG焦磷酸化酶(UPG)測(cè)試盒微量法

      簡(jiǎn)要描述:UDPG焦磷酸化酶(UPG)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:快速硫化氫試驗(yàn)瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)H2S Test Medium250克彎曲桿菌的硫化氫試驗(yàn)脫氧核糖核酸甲基綠瓊脂基礎(chǔ)進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Dnase Agar Base With Methyl Green100克用于細(xì)菌的DNA水解試驗(yàn)波爾頓肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Bolton Selective Enrichment Broth250克彎曲桿菌的選擇性增菌培養(yǎng)彎

      • 產(chǎn)品型號(hào):
      • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
      • 更新時(shí)間:2023-12-24
      • 訪  問  量:1486

      詳細(xì)介紹

      特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

      產(chǎn)品名稱:UDPG焦磷酸化酶(UPG)測(cè)試盒微量法

      產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

      檢測(cè)方法:微量法

      產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6986

      產(chǎn)品分類:糖原系列
      商品介紹:

      測(cè)定意義:

      UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖(UDPG)。

      測(cè)定原理

      UGP可逆催化反應(yīng)生成1磷酸葡萄糖,在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。

      自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

      天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

      所需的儀器和用品:

      可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

      四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

      建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

      樣本和試劑浪費(fèi)!

      1、樣本制備

      組織樣本:

      取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

      勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

      【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

       

      細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

      先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

      提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

      12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

      【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

      4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

      QQ截圖20220307153537.png 

      實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

      一、肝素的配制:

      市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

      肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

      二、血液樣本的收集:

      全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

      1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

      2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

      選擇抗凝的注意點(diǎn):

      ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

      ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

      ③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

      ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

      用于測(cè)定。

      250U Tth DNA聚合 Tth DNA Polymerase -20℃保存

      250mL PBlec Washing Solution in PBS,pH7.0,2X   PBlec Washing Solution in PBS,pH7.0,2X   常溫保存

      20次 裂殖酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒(含高效轉(zhuǎn)化液) S. pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit 常溫

      50T 水貂腸炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      RNS  250g

      1瓶 Tca-8113細(xì)胞株 Tca-8113 低溫運(yùn)輸和保存

      煌綠瓊脂 Brilliant Green Agar 250g

      1mL 纖連蛋白 ( 人血 ) Fibronectin(FN) From Human Plasma     -20℃保存

      50T 副流感病毒Ⅰ型PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      300µL 兔抗雞IgY,辣根過氧化物標(biāo)記 Rabbit Anti-Chicken IgY,HRP Conjugate -20℃保存

      2 ug Super PiggyBac Transposase Super PiggyBac Transposase 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

      UDPG焦磷酸化酶(UPG)測(cè)試盒微量法DSCC1  DSCC1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-PDGF Receptor beta (Tyr1009)  磷酸化小板源性生因子受體-B抗體 規(guī)格: 0.1ml

      Phospho-HER2 (Tyr686)  磷酸化HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1mlInhibin beta A/Activin A  抑制素βA抗體 Inhibin βA 規(guī)格: 0.2ml

      Mouse Anti-Guinea pig IgG  小鼠抗豚鼠IgG 規(guī)格: 1mgRabbit Anti-Biotin/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml

      BFSP2/Phakinin  晶狀體蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-c-Raf(Ser296)  磷酸化原基因c-Raf抗體 規(guī)格: 0.1ml

      Goat Anti-Mouse IgG/FITC  FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.3mlHPV16-E6  人類狀瘤毒16抗體 規(guī)格: 0.1ml

      Phospho-FoxO1(Thr24)/FoxO3a(Thr32)  磷酸化叉蛋白家族抗體 規(guī)格: 0.1mlH9N1 Neuraminidase  A型毒H9N1神經(jīng)型抗體 規(guī)格: 0.2ml

      ATRN  吸引素抗體 規(guī)格: 0.2mlMATH1  腸道分化干細(xì)胞MATH-1蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

      Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser939)  磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格: 0.1mlEukaryotic aspartyl protease  天冬蛋白家族蛋白抗體 規(guī)格: 1ml

      Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser118)  磷酸化雌激素受體α抗體 規(guī)格: 0.1mlACE1/CD143  管緊張素轉(zhuǎn)換ACE1抗體 0.1ml

      ZNF379/ZDHHC9  鋅指蛋白379抗體 規(guī)格: 0.2mlCRISP3  富含半胱分泌蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

      Rabbit Anti-horse IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml

      SLC44A1/CD92  溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體 規(guī)格: 0.2ml 

      注意事項(xiàng):

      1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

      2、對(duì)照管只需要做一管。

      3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

      4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

      對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

      若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

       


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