豬霍亂病毒即PCR檢測試劑盒說明書

原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

技術原理：
 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（ DNA高溫變性低溫復性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

小腸結腸炎耶爾森氏菌 Yersinia enterocolitica布魯塞爾德克酵母 Dekkera bruxellensis

惡臭假單胞菌 Pseudomonas putida葡枝霉 Rhizopus stolonifer

緩沖MUG瓊脂/緩沖4-甲基傘形酮葡糖苷酸瓊脂/Buffered MUG Agar濾膜MUG法檢測食品中大腸菌數(shù)100克國產(chǎn)/進口

神經(jīng)肽S(NPS)重組蛋白英文名稱：Recombinant Neuropeptide S (NPS)

LLC-MK2(恒河猴腎細胞)5×106cells/瓶×2

脫氫牛膽汁/脫氫牛膽粉/OX Bile dihydrate purifiedBR250克國產(chǎn)/進口

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae雅致放射毛霉 Actinomucor elegans

BSA標準梯度濃度試劑盒(即用型)-鼠IgG1ml x 7國產(chǎn)

硝酸蛋白胨水培養(yǎng)基/硝酸胨水培養(yǎng)基/Nitrate Peptone Medium綠膿桿菌硝酸還原產(chǎn)氣試驗250克國產(chǎn)/進口

桿菌屬 Lactobacillus sp.釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

爪哇霉 Rhizopus javanicus大鼠卵巢顆粒細胞*培養(yǎng)基

豬霍亂病毒即PCR檢測試劑盒說明書P19(小鼠畸胎瘤細胞)人肝細胞

植物桿菌 Lactobacillus plantarumSK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞

雙孢蘑菇鼠李糖桿菌 Lactobacillus rhamnosus

敘利亞倉鼠腎細胞蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

小鼠頜下腺上皮細胞*培養(yǎng)基SF763(人腦瘤細胞)

戊糖桿菌 Lactobacillus pentosus溝腸桿菌 Enterobacter cloacae

香菇 Lentinula edodes頂孢霉 Cephalosporium acremonium

801-D (人巨細胞性肺細胞)恒河猴腎細胞

糖化酵母 Saccharomyces diastaticus 細胞名稱

苜蓿中華根瘤菌凝結芽孢桿菌 Bacillus coagulans

RL95-2(人內(nèi)膜細胞)豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna

繩狀青霉 Penicillium funiculosumHela S3(人宮頸細胞)

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti三硝基苯硝胺梭菌 Clostridium tetryl

人前脂肪細胞*培養(yǎng)基灰色鏈霉菌 Streptomyces griseus

 細胞名稱大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞（低分化）

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae熱帶假絲酵母 Candida tropicalis