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      肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法

      簡要描述:肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法公司正在出售的產品:亮綠瓊脂進口、國產Brilliant Green Agar250克分離培養梭菌進口、國產Clostridium Enrichment Medium250克用于梭菌增菌培養哥倫比亞瓊脂進口、國產Columbia Agar Medium250克營養要求較高的細菌的及溶血試驗,梭菌的檢測哥倫比亞4-甲基傘形酮葡糖苷酸進口、國產Columbi

      • 產品型號:
      • 廠商性質:經銷商
      • 更新時間:2023-12-13
      • 訪  問  量:633

      詳細介紹

      特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

      產品名稱:肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法

      產品規格:50管/48樣

      檢測方法:紫外分光光度法

      產品貨號:BK-01S6956

      產品分類:其它系列
      商品介紹:

      測定意義:

      C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌類中,該酶催化肉桂酸羥化作用產生4-香豆酸鹽,是苯丙烷途徑中繼L-苯丙解氨酶之后的第二個關鍵酶。

      測定原理:

      C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映C4H活性。

      需自備的儀器和用品:

      紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

      所需的儀器和用品:

      可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

      四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

      建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

      樣本和試劑浪費!

      1、樣本制備

      組織樣本:

      取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

      勻漿(或使用各類常見勻漿器)4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

      【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進行提取

       

      細菌/細胞樣本:

      先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

      提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

      12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

      4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

      QQ截圖20220307153537.png 

      實驗方法學:

      一、肝素的配制:

      市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

      肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

      二、血液樣本的收集:

      全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

      1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。

      2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

      選擇抗凝的注意點:

      ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

      ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

      ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

      ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

      用于測定。

      吖啶黃素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5

      100mg 5- 溴 -4- 氯 -3-  -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存

      500支 1.5 mL RNase-free 離心管  常溫

      250 T 過氧化氫定量分析試劑盒(水兼容性) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

      50mL Manganese Chloride Solution(溶液),1M  Manganese Chloride Solution,1M  常溫保存

      0.5mL NTP溶液,10 mM NTP Solution,10 mM -20℃保存

      2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低溫運輸,-20℃保存

      氣單胞菌添加劑  5支

      1瓶 PC-12(未分化)細胞株 PC-12(未分化) 低溫運輸和保存

      疊氮鈉葡萄糖肉湯 Azide Dextrose Broth 250g

      25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室溫干燥保存

      肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法COMMD10  銅代謝結構域蛋白10抗體 規格: 0.2ml

      Complement C3b alpha' chain  補體C3b-α鏈抗體 規格: 0.1ml

      CYP17  細胞色素P450 17抗體 規格: 0.1ml

      Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus)  基爾曼氏細小毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在毒KRV)C端 1ml

      Mouse Anti-Goat IgG/Bio  標記的小鼠抗羊IgG 規格: 0.1ml

      Ran/ARA24  雄激素受體相關蛋白24抗體 規格: 0.2ml

      CHFR  泛素連接蛋白CHFR抗體 規格: 0.2ml

      Goat Anti-human IgG/AP  堿性磷酸(AP)標記的羊抗人IgG 規格: 0.1ml

      FOXF1  叉蛋白F1抗體 規格: 0.2ml

      CHORDC1  含半胱和組豐富域蛋白1抗體 規格: 0.2ml

      Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP  堿性磷酸(AP)標記的兔抗小鼠k鏈 規格: 0.1ml

      VEGF-C  管內皮生因子C型抗體 規格: 0.1ml 

      注意事項:

      1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

      2、對照管只需要做一管。

      3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

      4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

      對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

      若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通常可以使測定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

       


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