人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)免疫組化試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟：

1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度

2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；

3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%乙醇2 min；75%乙醇2min，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗2×2min；

4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗2×2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第5 步封閉。

5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；

6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜；

7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；

9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30 min；

10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；

11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；

12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），

37℃濕盒中孵育30 min；

13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；

14.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；

15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；

16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；

17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。

磷酸化有絲分裂激酶B/C抗體

磷酸化腺泡Acinus蛋白抗體

磷酸化腎上腺素能受體β2抗體

APS抗體

激活素受體樣激酶1抗體

激活素A受體1B抗體

磷酸化雄激素受體抗體

磷酸化A-Raf抗體

酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體

脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體

腺相關(guān)病毒5抗體

腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體

腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體

磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

磷酸化蛋白激酶B2抗體

磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體